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基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp2/9)試劑盒

上海信帆生物代理銷(xiāo)售基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp-2/9)明膠酶譜試劑盒,現貨供應,歡迎?;|(zhì)金屬蛋白酶(mmp-2/9)試劑盒操作簡(jiǎn)單,*,靈敏度高歡迎。本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9 活性。試劑盒規格750T!

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
  • 更新時(shí)間:2023-09-15
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:5733
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所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫療等


基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp2/9)試劑盒描述:基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無(wú)活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解 細胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱(chēng)膠原酶。通過(guò)影響細胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重過(guò),、、、經(jīng)多疾過(guò)。血漿與組 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過(guò)程,其在研究診斷和治療中的意義日益受到重視。

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 SDS-PAGE 相凝蛋白酶,其靈敏 1 nM, ELISA 2, 本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電 泳, 電泳結束后取出凝膠與酶反應 Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 , 色背,在有蛋帶的,酶將降膠中的, 而形 ,同時(shí)指 MMP-2、MMP-9 小位()。劑盒MMP-2、MMP-9 蛋白物及學(xué)反緩沖,可測少 0.1~0.5 µl MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性,檢 測靈敏度~1 nM。試劑盒可進(jìn)行 50 次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為 10~15個(gè),則總計可檢測 500~750 個(gè)樣品。

基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp2/9)試劑盒適用: 檢測 MMP-2、MMP-9 酶譜及活性(Detect MMP2 and MMP9 as low as 1 nM)。

組成與儲存 (50 assays)

1.2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml µl, 20 oC;
2.10 × Substrate G, 50 ml, 20 oC;
3. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 oC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋?zhuān)?/span>

4. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 oC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋?zhuān)?/span>

5. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍染色液, 4 oC。

檢測步驟:

1. 制備含 MMP 底物蛋白的 SDS-PAGE 凝膠:推薦分離膠濃度為 8%。按照標準程序制備 SDS- PAGE 凝膠。將 10 × substrate G 融化,并 90 oC 加熱 5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加 入 10 × substrate G 并使之稀釋 10 倍,混勻后加入過(guò)硫酸銨和 TEMED,等待凝膠聚合。

2. 待測樣品 1:1 稀釋于 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制:4% SDS, 100 mM Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue),混合后直接上樣。切勿加熱變性,并且僅 使用不加還原劑的上樣緩沖液??赏ㄟ^(guò)預試驗確定加樣量,使用普通蛋白預染  Marker 即可。陽(yáng) 性對照(可選步驟):可取人、小鼠、大鼠或兔 100µl 全血與 100µl 2 × SDS-PAGE non-

reducing buffer 等體積混合,取 5-15µl 上樣。

3. 低電流恒流電泳,每一塊小膠電流為 20mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時(shí)結束電泳。

4. 洗滌凝膠:取出凝膠,去除濃縮膠,放入容器內.可先用適量蒸餾水沖洗凝膠,然后加入10ml

1× Buffer A(用蒸餾水稀釋),室溫漂洗凝膠 2 × 30 分鐘。中間換液。

5.  孵育:倒掉 Buffer A。加入 10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋),室溫或 37oC 孵育 1~5 小時(shí)。陽(yáng)性 對 照或者血中的 MMP 通常 37oC 孵育 1 小時(shí)即可顯示。如 MMP 活性低,應延長(cháng)孵育時(shí)間為 10 小時(shí)或 過(guò)一夜。

6.  顯色:倒掉 Buffer B,加入 SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍染色液(操作步驟見(jiàn) SDS-PAGE 凝 膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍染色液說(shuō)明書(shū))。凝膠的大部分區域被深染,在有 MMP 條帶的位置 不被染 色而形成透亮區域。透明區域的位置和范圍指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及 活性。陽(yáng) 性對照將在 66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa 位置出現透明條帶。

7. 條帶掃描:將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然 MMP 條帶透明,但凝膠背景并非真正全黑。解決 辦法:可用非透射光掃描,或用軟件圖像處理程序調整背景顯示為灰度顯示,并盡量設置為黑色.MMP條帶則為白色,這種背景黑條帶白的格式是英文論文中zui常見(jiàn)的格式。


說(shuō)

1. 10 mM 能夠 EDTA *抑制 MMP 活性。

2. 凝膠干燥:可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠,作為*記錄保留。

參考文

  1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494

  2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem,1980, 102, 196–202

SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍染色液說(shuō)明書(shū)(試劑盒自帶)

常規考馬斯亮藍 SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)染色是實(shí)驗室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度 高,但所需試劑復雜并且有毒有害,操作步驟繁瑣,難以控制獲得好的染色效果。

染色步驟:

1. 此染色液即為工作液,使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝 膠,并緩慢搖動(dòng) 2h;

2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;

3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動(dòng) 2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至獲得清晰的 藍色的條帶和干凈的背景(通常此過(guò)程需要 2~4h,也可脫色過(guò)一夜至清晰的藍色的條帶和干凈 的背景);

4. 對凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在    7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置對 凝膠進(jìn)行處理后保存。

安全性:含有甲醇,無(wú)特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規程處理。

說(shuō)明:

1. 染色液配方:0.25g 考馬斯亮藍 R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸,定容至 1000ml,混合 1h 后用 Whatman 1 號濾紙過(guò)濾,于室溫可無(wú)限期保存;

2. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);

3. 保存液:7%冰醋酸;

4. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內,室溫或 4 oC 保存,可反復使用 2-4 次。




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